Tincion de especiales - Microscopía Electrónica
- Introducción
- Microscopía de luz V EM
- Ejemplo de usos EM
- Procesos EM
Los directores de microscopía electrónica implican el uso de una máquina altamente especializado llamado el microscopio electrónico de transmisión (TEM). Esto es similar a la de un microscopio de luz, pero hay varias diferencias clave. Por ejEMplo en vez de utilizar la luz, utiliza electrones en un haz de alta tensión para enfocar la imagen. También en lugar de vidrio que utiliza lentes electromagnéticas en enfocar la imagen.El microscopio electrónico de transmisión es muy complicada pieza de maquinaria con los ajustes que sólo deben ser alterados por ingenieros capacitados. Opera utilizando los mismos principios básicos como un microscopio de luz, excepto que utiliza electrones en forma de un haz de alta tensión en lugar de luz para la visualización.
Diagrama 1 - ¿Cómo el microscopio electrónico de transmisión funciona para producir imágenes
El microscopio de electrones para producir la imagen requerida utiliza un haz de electrones de alta tensión. Los electrones son EMitidos desde el cañón de electrones cuando se pasa a través de un alto voltaje. El cañón de electrones está normalmente equipado con un filamento de tungsteno de alambre en forma de V que cuando se calienta en un vacío, libera los electrones libres necesarios para el proceso. Rodeando el filamento es el escudo wehnet, que es la abertura utilizada para enfocar y controlar los electrones EMitidos a través de la abertura de ánodo y aceleradas a entre 30 -100 kV velocidad en la columna.
Aquí las bobinas electromagnéticas se utilizan como lentes para enfocar, mediante la alteración de la fuerza del campo magnético. Esto implica la lente de condensador se utiliza para recoger los electrones y determinar el diámetro del haz (Tamaño de punto) en la muestra. Después de que los electrones que pasan a través de la muestra entran en el objetivo, las lentes intermedios y proyector para producir la imagen, centrándose, de aumento y dirigir el haz sobre la pantalla de formación de imágenes. La imagen posterior es producida por los electrones ya sea absorbida por la muestra o ser desviado en ángulos pequeños y así ayudar a producir la imagen final, como varios millones de electrones pasan a través de la muestra para producir la imagen final.
| Comparación de Luz con microscopios electrónicos | ||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Características | microscopio de luz | TRANSMISIÓN EM | EXPLORACIÓN EM | |||||||||||
| Función principal | la morfología de la superficiey secciones 1-10 micras | Secciones 40-150 micras o pequeñas partículas | la morfología de la superficie puede escanear los especímenes más grandes que TEM | |||||||||||
| Fuente de iluminación | Luz | elctrons alta velocidad en vacío | elctrons alta velocidad en vacío | |||||||||||
| Resolución normal | 200 nm | 0,2 nm | 3-6nm | |||||||||||
| Margen de aumentos | 10 - 1000X | 500x-500kx | 20x-250kx | |||||||||||
| Tipo de lente | Vidrio | electromagnética | electromagnética | |||||||||||
| Formación de la imagen | El ojo mediante lentes | En la placa fosforescente por las lentes | El tubo de rayos catódicos por el dispositivo de escaneo | |||||||||||
En el laboratorio, la aplicación de diagnóstico más común del microscopio electrónico de transmisión es ayudar en el diagnóstico de enfermedades biopsia renal. Esto se utiliza en los casos en que un análisis más detallado que sólo puede ser proporcionado mediante el uso de microscopía electrónica para proporcionar un diagnóstico definitivo por ejEMplo, la enfermedad de Alport, por ejEMplo, nefropatía o mEMbrana delgada.
Foto 1 - La biopsia renal con microscopia de electrones utilizado
La microscopía electrónica también se puede utilizar para las biopsias musculares, donde los resultados ayudan a confirmar el diagnóstico de pacientes para los trastornos musculares, ya que es posible diferenciar entre el músculo normal y anormal, así como ciertas estructuras como varillas nEMaline e identificar inclusiones. Sin EMbargo, es más común el uso de técnicas moleculares y paneles de anticuerpos de la CPI para hacer el diagnóstico y el microscopio electrónico de transmisión es menos utilizada en casos de músculos que es para las biopsias renales.
Foto 2 - La biopsia muscular con microscopía electrónica utilizada 
microscopía
Electron también tiene un papel para el laboratorio con biopsias de nervio en la investigación de las neuropatías periféricas, aunque éstos rara vez se ven en el laboratorio.
Foto 3 - Microscopía Electrónica del axón con mielina de los nervios 
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Horario procesamiento Epon es un proceso largo que implica el uso de tetróxido de osmio para fijar los lípidos como un fijador secundaria y acetato de uranilo para permitir el resaltado de las proteínas y mEMbranas para más adelante. También requiere la deshidratación completa del tejido antes de Epon o resina epoxi pueden penetrar en el tejido utilizando el siguiente programa.
.| EPON horario procesamiento NOCHE | ||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Reactivos | Time | |||||||||||||
| EM Buffer | 10 min | |||||||||||||
| EM Buffer | 10 min | |||||||||||||
| EM Buffer | 10 min | |||||||||||||
| 2% tetróxido de osmio | 1 hora | |||||||||||||
| El agua destilada | 10 min | |||||||||||||
| El agua destilada | 10 min | |||||||||||||
| El agua destilada | 10 min | |||||||||||||
| 2% Aqeuous uranilo acetato | 45 min | |||||||||||||
| El agua destilada | 10 min | |||||||||||||
| 35% de alcohol | 10 min | |||||||||||||
| 70% de alcohol | 15 min | |||||||||||||
| Espíritu | 15 min | |||||||||||||
| Acetona (seca) | 30 min | |||||||||||||
| Acetona (seca) | 30 min | |||||||||||||
| Acetona (seca) | 30 min | |||||||||||||
| Acetona / Epon 1: 1 | 1 hora | |||||||||||||
| Acetona / Epon 1: 3 | 2 horas | |||||||||||||
| Epon | 2 horas | |||||||||||||
| Epon | 6 horas | |||||||||||||
| TiEMpo total | 16 horas 5 min | |||||||||||||