Tenicion de histologia - Fijacion
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- Artefactos
- Tipos Fijador y ejemplos
- Mas Fijadores
La fijación del tejido se utiliza por varias razones, que incluyen la prevención de la putrefacción de las bacterias, la autolisis de la degradación de la enzima y la pérdida de sustancias solubles. La mayor parte de fijación del tejido también ayuda a mejorar en las técnicas de tinción inmunohistoquímica posteriores como, si es necesario y también hematoxilina rutina y eosina.
Fijación conserva una muestra de material biológico (tejido o células) lo más cerca a su estado natural como sea posible en el proceso de preparación de tejido para su examen. Para lograr esto, por lo general se deben cumplir varias condiciones.
En primer lugar, un fijador generalmente actúa para prevenir la autolisis. Esta es la autodestrucción de la célula por las propias enzimas del cuerpo, que son liberadas por los lisosomas de rotura después de la muerte. Ellos causan más daño a los tejidos blandos como el cerebro que al tejido más duro como el colágeno. Los agentes de fijación hacen esto mediante la desactivación de enzimas proteolíticas y así evitar cualquier daño que ocurra a los tejidos de su actividad.
En segundo lugar, un fijador normalmente protege una muestra de la putrefacción. Esta es la destrucción de la célula por las bacterias que normalmente son commencals, pero después de la muerte se propagan rápidamente causando la descomposición. Los fijadores son tóxicos para los microorganismos más comunes como bacterias, que pueden existir en una muestra de tejido o que de otro modo podría colonizar el tejido fijado. Además, muchos fijadores alteran químicamente el material fijado para que sea tóxico o indigestable para los microorganismos oportunistas, ayudando así a prevenir putrefacation.
Finalmente, fijadores menudo alteran las células o tejidos en un nivel molecular para aumentar su resistencia mecánica y estabilidad. Este aumento de la resistencia y rigidez ayuda a preservar la morfología de la muestra, lo que es importante más adelante para lograr un diagnóstico preciso para los pacientes.
A pesar del cuidado tomado a veces incluso la fijación más cuidadosa afectará el tejido e introducir artefactos artificiales no deseados que pueden interferir con la interpretación de la estructura celular.
Un ejemplo histórico muy bien conocido de este fenómeno fue el mesosoma bacteriana que al principio se creía que era un orgánulo en las bacterias gram-positivas. Sin embargo, esto se muestra más adelante por las nuevas técnicas desarrolladas para microscopio electrónico para ser un artefacto fijación química.
Normalización de fijación y otros procedimientos de procesamiento de tejidos debe ser cuidadoso para dar cuenta de los artefactos mediante la comprensión de cuáles son los procedimientos que introducen tipo de artefactos. Los investigadores deben saber qué tipos de artefactos esperar con cada tipo de tejido y la técnica de procesamiento de interpretar con precisión las secciones con los artefactos, o idealmente selectas técnicas que reduzcan al mínimo la producción de artefactos en las áreas que están siendo analizados.
Aquí es una lista de los principales tipos de fijadores que se pueden utilizar, así como algunas de sus ventajas y desventajas
| Fijadores Pros y Contas | ||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Fijadores | Effect | Características prositive | Características negativas | Type | ||||||||||
| Neutral Buffered Formalina (10% NBF) | Formas cruzan vínculos entre los grupos de proteínas, dependiente del pH. | Fijador Tolerante como sustancias se puede dejar en indefinidamente sin daño. Enlaces cruzados pueden romperse fácilmente con agua, por lo que los grupos de proteínas disponibles para otras reacciones. El tejido se mantiene suave que es bueno para la disección y el procesamiento. Los glóbulos rojos y detalle citológico bien conservados | Sustancia puede ser tóxica, carcinogénica, agente peligroso Sensibilizar, el tejido debe ser de 1 cm como máximo | Compuesto fijador, aldehído | ||||||||||
| Glutaraldehído | Formas cruzan vínculos entre los grupos de proteínas, dependiente del pH. La principal diferencia tiene 2 grupos aldehído y una reacción más rápida. | Muy buena morfología del tejido para su posterior comparación con la fijación con formalina | Poor penetración en el tejido, difíciles de eliminar del tejido | Aldehído | ||||||||||
| Acido de acetico | Potente precipitador de nucleoproteína. | Preservación Buena ADN | Hace que el tejido se hinche., Tinción citoplasmática Pobres y tinción mitocondrias | Agente desnaturalizante | ||||||||||
| Etanol | Disuelve grasas, desnaturaliza las proteínas y ácidos nucleicos. | Preservar la reactividad química de muchos materiales celulares. Útil en combinación fijador por ejemplo alcohol acético | La contracción del tejido, puede volverse frágil en el tiempo | Agente desnaturalizante | ||||||||||
| Fluido de carnoy | El alcohol, cloroformo y ácido acético | Permitir la rápida penetración del tejido por la tinción, especialmente tinción con colorantes ácidos. Bueno para cromosomas de fijación, ganglios linfáticos y pequeñas biopsias. Fijación rápida después de sólo ½ horas - 3 horas, conserva glucógeno, después de la fijación puede transferir directamente al alcohol | La contracción del tejido excesivo, las células rojas de la sangre destruidas y sólo es utilizable en el tejido pequeña | Fijadores citológicos - Nuclear | ||||||||||
Aquí es una lista de otros tipos de fijadores menos comunes que pueden ser utilizados, así como algunas de sus ventajas y desventajas
| Fijadores Pros y Contas | ||||||||||||||
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| Fijadores | Effect | Características prositive | Características negativas | Type | ||||||||||
| El dicromato de potasio | pH, pH alto actúa como no coagulante, pH ácido como coagulante. | Efecto fijador fuerte en ciertos lípidos, útiles para el estudio de fibras nerviosas mielinizadas. | Peligro para la salud en el laboratorio, equipo de protección personal requerido alrededor. También se disuelve ácidos nucleicos | Agente oxidante | ||||||||||
| Tetróxido de osmio | Fijador aditivo resulta de proteína en un gel. Añade en dobles enlaces también. | Bueno para la fijación de lípidos, ya que añade en un doble enlace | Peligro para la salud puede causar irritación de ojos, nariz y garganta, también toma muy caro amplio uso práctico | Agente oxidante | ||||||||||
| ácido pícrico | Normalmente se utiliza en combinación con otros fijadores. Desnaturaliza las proteínas. | Preservación glucógeno Excelente, mejora la tinción ácida | Daños tinción básica tinte | Agente desnaturalizante | ||||||||||
| Solución Bouin | Contiene ácido pícrico, formaldehído y ácido acético glacial | Buena conservación de tejido, por ejemplo vesículas seminales, bueno para el glucógeno, bueno para las pequeñas biopsias debido a los tintes de color amarillo | Más pobres para el detalle citológico, pobre penetración en el tejido, tejido pequeño sólo | Fijador microanatómico | ||||||||||
| Solución Zenker | Contiene cloruro de mercurio, dicromato de potasio | Excelente tinción nuclear y el tejido conectivo, especialmente para tricrómico manchas | Poor penetración del tejido, debe ser 0.5 cm o menos, el tejido se vuelve quebradizo después de 24 horas de exposición. El tejido después de la fijación debe ser lavado en agua durante varias horas no utilizables para los cortes congelados. Solución no se conserva bien después del ácido acético agregó. | Fijador microanatómico | ||||||||||
| Cloruro de mercurio | Fijo tejido uniendo a las proteínas y las formas se cruzan enlaces | Permitir la rápida penetración del tejido por la tinción, especialmente tinción con colorantes ácidos | Daños de exposición excesiva de tejido y hace difícil microtomía | Agente desnaturalizante | ||||||||||