Tenicion de histologia - Hematoxlina y eosina

La tinción Hematoxilina y eosina implica dos procesos principales de la química del tinte. El primer proceso se lleva a cabo al morir el tejido en hematoxilina de Harris, que luego se sobrecolorear el tejido para permitir la penetración completa por la solución. La hematoxilina es un colorante básico con una carga + a la misma, por lo que se mancha los ácidos nucleicos cargados negativamente en los núcleos. A continuación, el tejido se toma a través del agua antes de entrar en alcohol ácido para eliminar algunos de los hematoxilina que había sobretiñe el tejido. Después se pasa por agua otra vez antes de ser azulado en carbonato de litio, lo que altera la coloración hematoxilina teñido de tejidos de púrpura a azul.           

Por último, después de todo esto, el tejido se somete a la segunda parte del procedimiento. Es entonces se tiñe contador usando el otro tinte principal Eosina que los colores de la parte no núcleos del tejido a / coloración rojo rosa para permitir un contraste. Esto se logra como eosina es un colorante ácido, con una carga negativa que se mancha hasta + áreas encargadas del tejido por ejemplo citoplasma. Entonces la corredera finalmente pasa a través de al agua, a continuación, se deshidrataron en alcohol antes de ser despejado en xileno y se montaron en un Agente de medio de montaje CV, a acheive mejor resolución bajo el microscopio.

A continuación se presentan los resultados de perderse un paso en el proceso, con el tejido de la piel para demostrar la importancia de los pasos de tinción hematoxilina y eosina. Los resultados se muestran a continuación.           

Foto 1 - x10 Ninguna sección hematoxilina Foto 2 - x10 No carbonato de litio

Foto 3 - x10 Nada de alcohol ácido Foto 4 -X10 No Eosina

Foto 5 - Normal H & E imagen

Las diferentes etapas de la hematoxilina y eosina son todos necesarios para la producción del resultado de tinción esperado. En la primera foto, sin la etapa de hematoxilina, los núcleos son sin teñir, mientras que en la segunda etapa de la foto sin carbonato de litio de azulado, los núcleos son coloración más oscura de color púrpura y la mancha es más oscuro en general. En la tercera foto, falta de paso de ácido alcohol para diferenciar el plomo hematoxilina a la producción de tinción mucho más oscuro del tejido en general. Mientras que en la cuarta foto sin la eosina, solamente los núcleos son visibles y no mancha contador significa que el resto del tejido no es visible en estas circunstancias. La foto final muestra lo que el H & E se ve como con todos los pasos realizados.

En H & amp; E tinción, hay dos variaciones principales utilizados. La primera versión utiliza una tinción progresiva donde el tejido se tiñó con hematoxilina entonces azulado con carbonato de litio sin el uso de alcohol ácido, ya que no se requiere como se aplica la hematoxilina hasta que se consigue la tinción deseada, y luego que se complete. Un ejemplo de esto es es hematoxilina Mayer. Mientras que la segunda versión es la tinción regresiva. Aquí es donde el tejido se sobretiñe con hematoxilina, que se retira a continuación, utilizando ácido alcohol antes de que sea azulado utilizando carbonato de litio. En la tinción regresiva, es muy importante diferenciar ya que sin ella, la tinción será demasiado oscura. Un ejemplo de este tipo de tinción se ve con hematoxilina Harris, que es la variación más comúnmente utilizada de Hematoxilina. La técnica para llevar esto a cabo es a continuación.

Tecnica 

1.     Lugar sección en Xileno para desparafinar. 5 minutos

2.     Lave en el 100% de etanol 30 segundos

3.     Lave en IMS                                    30 segundos

4.     Lavar en agua corriente 2-5 segundos

5.     Colocar en Hematoxilina                      5 minutos

6.     Lave en agua.

7.     Diferenciar en 1% Ácido Alcohol 2 a 5 segundos.

8.     Lave en agua.

9.   Entonces Azul inLithium carbonato.

10.     Compruebe tinción nuclear microscópicamente antes de continuar, ajustar si es necesario.

11. Lave en agua, enjuague en IMS.

12. Manchas en Eosina 30 segundos.

13. Lave en IMS      

14. Deshidratar, aclarar y montar.

Results

Nucleos	Agua
Citoplasma, tejidos conectivos, glóbulos rojos	Rosa/Rojo

 

 

Hay muchos diferentes variaciones de hematoxilina, todos ellos sin embargo, tienen una marca parecida a como se muestra en la siguiente tabla.

3 componentes principales de Harris hematoxilina y su función
constituyentes		Funciona
Hemateina		Producto oxidado de hematoxilina que actúan como la mancha, sin embargo, requiere un metal debido a su mordiente - carga que impediría muerte de - ácidos nucleicos cargados.
Oxido de mercurio		Agente oxidante utilizado en hematoxilina para producir el hemateina
Potasio Alum		Se utiliza como mordiente de metal en Harris hematoxilina. Esto le da al haematein una mejor afinidad por el tejido cuando está en uso. Otros mordientes se utilizan en otras versiones, por ejemplo tungsteno o hierro.